本发明公开了一种非小细胞肺癌辅助诊断试剂盒。miRNA647作为检测非小细胞肺癌的miRNA标志物在制备非小细胞肺癌辅助诊断试剂中的应用。一种非小细胞肺癌辅助诊断试剂盒,包括由SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物。本发明发现了miRNA647表达水平与非小细胞肺癌的发生有关,通过检测血液中miRNA647的表达水平,结合临床症状可以判断其是否患有非小细胞肺癌或者是否存在患有非小细胞肺癌的风险,从而指导临床医师给予其预防方案或者治疗方案因此,检测miRNA647表达水平的引物、探针等试剂可以用于制备非小细胞肺癌辅助诊断试剂。